第2梯次的課程與第1梯次課程有些許的不同。一開場，我們依舊透過簡報裡的豐富動物圖片，帶領大朋友與小朋友們在山林裡穿梭，尋找各式各樣美麗而精彩的動物。然而，為了避免捕捉青蛙活體，對青蛙造成長時間的驚嚇與壓迫，因此，將接下來的課程內容變更為「生物多樣性金字塔」的紙牌遊戲。利用紙牌遊戲，一方面介紹玉里野生動物保護區內的動植物，另一方面則引導大朋友與小朋友瞭解生態系中食物網的觀念，以及說明設置保護區的重要性。下午課程的最後，我們依舊來到DIY教室，運用自己的創造力，製作出一個又一個精美的貓頭鷹筆筒。
用過晚餐後，我們驅車前往夜觀場地-掃叭隧道北口。這裡原是日治時期，鐵路台東線的隧道，後因地下水問題以及鐵路改道，因而廢棄。現今隧道口雖已經被封閉，但是地下水依舊潺潺流出，形成有豐富生物資源的溼地。今趟夜觀的天氣良好，於是我們在隧道口靜待蝙蝠的出現，而牠們也沒有讓大家失望。當天色漸暗，蝙蝠們一一從已經封閉的隧道缺口飛出，有些盤旋在身旁的植物間，有些則高飛至天空中；其中可以辨別出較小型的「台灣小蹄鼻蝠」，以及較大型的「台灣葉鼻蝠」。
蝙蝠為我們拉開夜間觀察的序幕，接著便是今天夜間觀察的主角：「尋找黃金溫泉蛙」，當然，在這豐富的溼地裡，並不會僅有日本樹蛙在迎接我們，同時還能看到叫聲像是拉肚子的拉都希氏赤蛙，以及整夜都在敲門的白頷樹蛙，當然腹斑蛙、褐樹蛙與盤古蟾蜍也在路邊的草堆中跳躍、散步，其他像是黑蒙西氏小雨蛙、斯文豪氏赤蛙也在耳畔叫著。尋找青蛙的同時，我們也在小山溝旁瞧見雙色澤蟹以及拉氏清溪蟹。到了尾聲，亦是夜間觀察的高潮時段，幸運的我們還瞧見了青蛇以及紅斑蛇，為此次的主題活動畫下完美的句點。
這一夜，來參加的大朋友與小朋友，當你們回到家中，一定還沉醉在耳畔的蛙鳴田野交響曲，並且夢著這些可愛動物，甜甜入睡吧。
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